DNA Konsantrasyonu ve Saflığı Hesaplama

DNA Konsantrasyonu ve Saflığı

Moleküler biyoloji laboratuvarlarında, izole edilen DNA'nın miktarını ve kalitesini bilmek, PCR, klonlama veya dizileme gibi sonraki adımların başarısı için kritik öneme sahiptir. Bu ölçüm genellikle UV spektrofotometre kullanılarak yapılır.

Ölçüm Prensibi

• A260: Nükleik asitler (DNA ve RNA), 260 nanometre (nm) dalga boyundaki UV ışığını maksimum düzeyde absorbe eder. Bu değer, çözeltideki nükleik asit miktarıyla doğru orantılıdır.
• A280: Proteinler (özellikle Triptofan ve Tirozin gibi aromatik amino asitler içerenler), 280 nm'de maksimum absorbans gösterir. Bu değer, olası protein kirliliğini (kontaminasyonunu) tespit etmek için kullanılır.

Hesaplama Formülleri

Standart olarak kabul edilen formüller şunlardır:

Buradaki 50 µg/mL, A260 absorbans değeri 1.0 olan çift zincirli DNA (dsDNA) çözeltisinin standart konsantrasyonudur. Tek zincirli DNA (ssDNA) için bu değer ~33, RNA için ise ~40'tır.

Sonuçların Yorumlanması

Hesaplanan saflık oranı (A260/A280), DNA örneğinizin kalitesi hakkında önemli bilgiler verir:

• ~1.8: Saf DNA olarak kabul edilir.
• < 1.8: Protein veya fenol gibi kontaminantların varlığına işaret edebilir.
• > 2.0: RNA kontaminasyonuna işaret edebilir.