PCR Master Mix Hazırlama Hesaplayıcı

PCR ve Master Mix Hazırlama

Polimeraz Zincir Reaksiyonu (PCR), belirli bir DNA bölgesinin milyonlarca kopyasının üretilmesini sağlayan devrim niteliğinde bir moleküler biyoloji tekniğidir. Çok sayıda örnekle çalışırken, her reaksiyon tüpüne bileşenleri tek tek eklemek hem zaman alıcıdır hem de pipetleme hatalarına yol açar. Bu nedenle, DNA kalıbı dışındaki tüm ortak bileşenlerin karıştırıldığı bir **Master Mix** (Ana Karışım) hazırlanır.

Master Mix Bileşenleri

• Buffer (Tampon): Reaksiyon için optimal pH ve iyonik koşulları sağlar. Genellikle 10x gibi konsantre stoklar halinde bulunur ve 1x nihai derişimde kullanılır.
• dNTP Mix: DNA'nın yapı taşları olan dört farklı deoksiribonükleotidi (dATP, dGTP, dCTP, dTTP) içerir.
• Primerler (İleri ve Geri): Çoğaltılacak DNA bölgesinin başlangıç ve bitişini tanıyan kısa, tek zincirli DNA parçalarıdır.
• Taq Polimeraz: Yüksek sıcaklıklara dayanıklı, yeni DNA zincirini sentezleyen enzimdir.
• DNA Kalıbı: Çoğaltılacak hedef bölgeyi içeren DNA örneğidir. Genellikle master mix'e en son ve her tüpe ayrı ayrı eklenir.
• Nükleaz İçermeyen Su: Reaksiyon hacmini istenen nihai hacme tamamlamak için kullanılır.

Bu hesaplayıcı, C₁V₁ = C₂V₂ (Başlangıç Derişimi × Başlangıç Hacmi = Son Derişim × Son Hacim) temel dilüsyon formülünü kullanarak her bir bileşenden master mix'e ne kadar eklenmesi gerektiğini hesaplar.